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哪些情況需要使用穩(wěn)定細(xì)胞系

更新日期: 2021-03-19
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  穩(wěn)定細(xì)胞系是指將外源基因整合到宿主細(xì)胞基因組中,使外源基因能夠在宿主細(xì)胞中長期穩(wěn)定表達(dá),這樣的細(xì)胞系稱為穩(wěn)定細(xì)胞系。其原理是將外源基因克隆到具有某種抗性的載體上,通過轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞,外源基因整合到宿主染色體上,用載體中所含抗性基因進(jìn)行篩選即可得到成功整合目的基因的細(xì)胞。在試驗(yàn)過程中,常用的真核表達(dá)載體抗性篩選標(biāo)志物有嘌呤霉素(puromycin)、新霉素(neomycin)、潮霉素(hygromycin)等。通過篩選可得到符合實(shí)驗(yàn)要求的穩(wěn)定高表達(dá)目的蛋白細(xì)胞株或者穩(wěn)定沉默目的基因的細(xì)胞株。
 
  其建立的原理是,將我們所要的目的基因真核到宿主細(xì)胞上,隨著細(xì)胞的生長繁殖,目的基因可以穩(wěn)定的表達(dá),在通過抗生素的不斷加壓篩選,得到構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系的過程。相對(duì)于瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染技術(shù)持續(xù)周期長,細(xì)胞整合穩(wěn)定,能夠滿足后期對(duì)蛋白的大量需求。
 
  以下情況需要使用穩(wěn)定細(xì)胞系:
 
  1、實(shí)驗(yàn)周期長,要求外源DNA在分裂細(xì)胞中長期表達(dá),>2周。
 
  2、需要構(gòu)建誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)。當(dāng)目的基因的過表達(dá)或者干擾需要時(shí)空特異性,或者會(huì)引起細(xì)胞毒性等不利影響。
 
  3、基因敲除/插入等修飾宿主細(xì)胞基因組的實(shí)驗(yàn)。
 
  4、篩選拷貝數(shù)適宜的細(xì)胞。
 
  5、對(duì)于某些很難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞種類。即使病毒載體也無法實(shí)現(xiàn)高效率轉(zhuǎn)導(dǎo)。
 
  6、通過構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞株實(shí)現(xiàn)更好的基因干擾效果。
 
  7、后續(xù)實(shí)驗(yàn)中需要將轉(zhuǎn)染細(xì)胞注射進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)。
 
  8、需要構(gòu)建單克隆細(xì)胞株可以去除個(gè)體差異。
 
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